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    ELISA細胞裂解液詳細步驟

    日期:2024-06-02 13:23
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    摘要:常規樣本處理方式 血液樣本 血液樣本分為全血、血漿、血清三種。簡單描述: 全血: 全血=血漿+血細胞。 血漿: 全血加抗凝劑后離心分離出來的淡黃色液體是血漿。 血清: 全血不加抗凝劑而自然凝固后分離出來的,不含纖維蛋白原的淡黃色液體是血清。 血液樣本是ELISA/液相實驗常用的樣本。在收集血液樣本的過程中應避免溶血,因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質,將會出現非特異性顯色反應,導致檢測結果不準確,出現假陽性結果。另外,樣本還需要避免污染,因為其可能會導致樣本含有內源性HRP,也會導致檢測結果不...
    常規樣本處理方式
    血液樣本
    血液樣本分為全血、血漿、血清三種。簡單描述:
    全血: 全血=血漿+血細胞。
    血漿: 全血加抗凝劑后離心分離出來的淡黃色液體是血漿。
    血清: 全血不加抗凝劑而自然凝固后分離出來的,不含纖維蛋白原的淡黃色液體是血清。
    血液樣本是ELISA/液相實驗常用的樣本。在收集血液樣本的過程中應避免溶血,因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質,將會出現非特異性顯色反應,導致檢測結果不準確,出現假陽性結果。另外,樣本還需要避免污染,因為其可能會導致樣本含有內源性HRP,也會導致檢測結果不準確。且要避免使用高血脂樣本。脂質會影響抗原抗體的結合,從而影響測值的準確性。
    3.細胞裂解液
    ①吸出培養板中的培養基,用胰蛋白酶消化細胞,再加入適量的培養基,將培養板上的細胞沖洗干凈(懸浮細胞可以省略該步驟);
    ②將細胞懸浮液收集到離心管中,在2-8C條件下,以1000xg離心5分鐘,再吸去培養基,用預冷PBS洗滌細胞3次;
    ③加入適量的預冷PBS(建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑),重懸細胞。添加比例:約1x106個細胞加入150-250uLPBS重懸細胞;
    ④使樣本在-20°C或-80°℃條件和室溫條件下反復凍融,重復凍融過程數次,直至細胞完全裂解。也可使用超聲波細胞破碎器,超聲處理懸浮液來裂解細胞;
    ⑤2-8°℃條件下,以1500xg離心10分鐘,去除細胞碎片,收集上清液。
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